如何选择BTX转基因仪（电转仪）
如何选择BTX转基因仪（电转仪）
1、 确定目标对象：也就是你所有转的目的物是什么东西？
细胞系和细胞类型
细胞类型包括人类、哺乳动物、**、植物、藻类、霉菌、寄生虫等
细胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyces Tobacco, Corn, Rice, Tomato，Trypanosome，E coli等
2、其次确定目的
目的包括：转染 转化 电整合 电插入 活体/卵的应用 核移植和克隆 细胞融合
然后根据这些来确定该选择什么类型的仪器。
1、 某位老师使用化学法转化大肠杆菌E.coli。他希望构建cDNA文库，但是不能得到好的转化效率。他以后还想做哺乳动物细胞。如何他如何来选择仪器
选择方案：ECM 399将是较好的选择，这仪器用来转化E.coli效果十分理想，同时操作简单。如果有足够的预算，可以选择ECM 630, 这样更符合他现在和将来的需求。
2、某位老师想要进行一些鸡胚的研究工作，他们希望转染鸡的眼睛，以便研究视觉膜的发育过程。他对卵的基因传递有一些了解。
选择方案：完成这个转染过程需要 ECM 830和活体电极Genetrodes。由于目标区域很小，他需要小的长的genetrode。方波适合动物体的活体转基因，同时针形的电极是卵的转基因的优选。
3、遗传研究中心希望开展某种**的基因**，首先从小动物例如小鼠，以后要在狗、猪等动物体开展。客户*初希望用基因枪的方法。但是觉得条件不易控制。
选择方案：基因枪不是理想的活体转基因的方法。基因枪容易伤害哺乳动物的组织，同时条件可控性差，DNA的转移效果不理想。推荐使用ECM 830 和2 Needle Array 用于小动物研究，对于大的动物研究的话还需配 caliper electrode
4、Dr. Mendle使用agrobacteria来转化**的原生质体。他在寻找快速在完整的植株上完成转基因的方法。此时如何选择？
选择方案:ECM 630和特殊电极。电极的选择需要根据植物转基因的部位。一般有三种电极可以选择Tweezertrode、 Caliper Electrode、 Needle Arrays.根据他所转的植物体大小，硬度等进行
5、Dr. Hofmann正使用脂质体方法转染原代神经细胞，但是结果差强人意，仅得到1%的转染效率。但是他不希望使用电转，因为怕杀死细胞。 这些希望不能被胰蛋白酶消化（会引起其他变化）所以他不能使用样品杯。给怎么办。
选择方案：推荐使用ECM 830 和petri dish 电极或者epizap电极。这样可以用*温和的方法完成原位转基因。
6、 Dr. Bloom希望你给他推荐一款融合仪。他过去使用化学的方法来进行的。怎么来推荐。
选择方案：如果费用允许， ECM 2001是*好的选择。它提供交流波能排列细胞，可以完成所有的细胞融合试验。如果费用不足的话，ECM830也可以完成核移植的工作，在融合时需要将两个细胞进行排列，或者细胞的浓度足够大。
以下是工作目的和相应的*佳仪器对照说明
·**/酵母转化 （系统：ECM399/630）
电穿孔现在被认作是转化**及酵母的*有效的方法。革兰氏阴性**（例如大肠杆菌）一般比革兰氏阳性**更容易转化，因为他们的细胞壁组成不同。对于革兰氏阴性**常常可以获得10的10次方转化2/微克DNA的转化效率，而对于革兰氏阳性**，一般可以得到10的6次方转化2/微克DNA。Chang等人（1997）成功对一个mtz-敏感的Heliobacter pylori菌株进行电穿孔以传递mtz抵抗性。Planelles等人（1999）使用电穿孔转化大肠杆菌，以避免使用包装物质。*近电穿孔仪器方面的进展将使研究人员能够进一步优化**转化（例如脉冲长度产生方面扩展的功能条件）。
RNA、DNA、蛋白质以及小分子都已经通过电穿孔的方法转入酵母。没有必要在电穿孔前部分去除酵母细胞壁，因为在完整酵母电穿孔方面的进展可以产生高的转化率。Faber等人（1994）年优化了S.Cerevisiae的实验方案，使用Hansenula Polymorpha获得了比以前的报告增加300倍的转化效率。
在质粒修复中，质粒从酵母转入大肠杆菌以进行详细的DNA序列分析，这是另外一种重要的技术。这种两个步骤的过程被电穿孔进行了简化，用于验证隐性基因的结构，将其导入酵母，看基因性和表现性之间的关系。已经建立了标准的实验方案使用指数衰减波发生器例如BTX ECM630转化**/酵母。使用方形波电穿孔仪的实验方案，例如BTX ECM830，来转化**/酵母。研究人员还成功将大的质粒（BAC及YAC）导入**。电穿孔杯是细胞及酵母电穿孔的*常用附件，而Model747共轴电极使用则变得越来越普遍。
·动物细胞转染 （系统：ECM630/830）
对真核细胞的转染可以通过多种方法获得，例如磷酸钙沉淀、脂质体转染、病毒方法以及电穿孔。电穿孔已经被正式对传统的转染方法不灵的细胞有很好的效果，因此被选为*佳的分子传递系统。电穿孔的好处有可重复性、更高的效率、大量样本处理、无毒性以及容易使用（不需要孵育时间）。
Lofin等人（1999）对NIH/3T3细胞进行电穿孔使mRNA进入，以研究细胞周期及细胞分化过程中mRNA对基因表达调节、控制。Bodwell等人（1999）在对COS-7细胞进行电穿孔是使用较长的脉冲时间后获得了较高水平的表达。Warner等人（1997）使用电穿孔方法成功转化了**细胞。Incyte Genomics公司成功使用BTX电穿孔仪转染了ES细胞进行转基因小鼠的生产。BTX ECM399\630\830型仪器、电穿孔杯以及多种特用的电极都用于动物细胞转染用途。
·蛋白质电整合/电插入 （系统：ECM630/830）
将蛋白质导入细胞以及将蛋白质插入至细胞膜中也可以通过电穿孔来实现。不光肽段，而且包括抗体的多种蛋白，也可以进行导入。Ushio-Fukai等人（1998）对电穿孔插入哺乳动物细胞中的外源蛋白进行了定量。对于这些用途可以使用多种BTX电极。
·植物细胞转化 （系统：ECM630/830）
对植物原生质（玉米、**等）及完整植物的电穿孔可以用于产生对农业/园艺有用的转基因作物。植物细胞转化的一个主要目的是对植物细胞进行稳定转化以产生具有优良品质及产量增加的作物。Lin等人（1997）优化了多种植物上用于GUS表达的电穿孔条件，结果显示完整植物细胞以及原生质都可以进行有效转化。Diaz等人（1994）针对小麦及燕麦的叶和根的原生质进行了相似的优化试验，证明了电穿孔对于植物工作的有效性。这些作者也比较了电穿孔与PEG的差别，结果发现电穿孔更有效、更有重复性、更经济。BTX是世界上体内转染用特殊电极的**者。对于这些用途可以使用多种BTX电极，例如2针阵列、游标尺电极 、以及Tweezertrodes。
·贴壁细胞的转染----ACT （系统：ECM630/830）
除了对盛在普通样品杯的悬浮细胞进行电穿孔外，还可以对多种培养板上的贴壁细胞进行原位电穿孔。这样可以避免用胰酶消化细胞，有助于保持细胞的活性及细胞数目。Lewis等人（1999）使用培养皿电极将基因转染入人类及静脉内皮细胞。Paptis等人（1998）通过对长在导电载玻片的NIH/3T3细胞进行原位电穿孔研究信号转导。Teruel等人（1999）也对位于载玻片上的海马神经细胞转入DNA、RNA以及多种大分子。BTX为贴壁细胞的转染（ACT）提供了PP35-2、366、747、840及Epizap电极系统。请关注不久后为这些用途开发的新产品
·高通量筛检----HTS （系统：ECM630/830）
高通量筛检及cDNA文库的建立，需要一次处理多个样本的能力。使用传统样品杯花费很大而且有时间限制。然而，96孔板里使用的电极对于这些类型的应用肯定有用。Hoffma-Tsay等人（1994）使用96孔共轴电极在植物融合实验中检测8种化学物质。Peterfy等人（1995）比较了多种类型的多孔电极，将DNA传递入COS-7细胞。Marrero等人（1997）使用多孔电极将抗体电导入血管平滑肌细胞，以诱导细胞增值。BTX目前提供747和840用于这样的用途，并且不断开发新的产品。
·大容量生产（LVP）及先体外后体内基因**（系统：ECM600F）
工业用大容量生产或者先体外后体内基因**也为社会所需。人们可以先在样品杯里优化条件然后将实验方案转成流水线作业，将实验进行比例放大。BTX ElectroFlowPorator系统有一个泵及一个改进了的电穿孔仪组成。泵可以进行编程并与电穿孔仪进行同步操作，以将脉冲传递多批的细胞。Parham等人(1999)使用流动性系统优化了CHO、COS-7、HEK293、NSO、CV-1细胞的短暂基因表达，，获得了满意的结果。
·胚胎操作/核移植/动物克隆 （系统：ECM2001/830）
核移植是将细胞核从供体转入受体的过程。细胞核指导胚胎的发育，导致新生体**出生。在这个过程中，电融合用于将供体细胞与受体卵细胞融合，并进一步激活细胞分裂，形成胚胎。Meng等人（1997）将核移植技术扩展至灵长类动物模型，克隆出恒河猴。技术的进步使研究人员能够从分裂球进展至更高分化的胚胎细胞以及静止的胚儿细胞，作为核的供应来源。胚胎产生的细胞在体外培养6-13代，然后在转入前使用血清饥饿的方法使细胞静止。如前文所述，Roble、Cibelli以及Stice是**次在1998年报告使用非老化胚成纤维细胞作为核的供体进行核移植而产生绵羊克隆转基因牛的人。Ian Wilmut在1996年震惊了整个世界，他从成年乳腺的细胞产生出**个动物克隆——多利。使用分化的成年细胞进行克隆的能力打开了核移植广泛运用的大门即基因**的令人激动的模式。*近的成功事例PPL Therapeutics公司从成年体细胞克隆出猪。对于这些用途可以使用多种细胞融合样品池及微型载玻片。
·动物细胞融合 （系统：ECM2001）
肿瘤及树突的电融合目前在过继性**疗法中进行使用。肿瘤细胞本身不能作为良好的抗原提成细胞，因此不会刺激T细胞生长。树突细胞是已经发现的*好的抗原提呈细胞，在融合后可以将肿瘤细胞转变成抗原提呈细胞。刺激后比未融合肿瘤细胞至少增加100倍。对于这些用途可以使用多种细胞融合附件及微型载玻片。
·杂交瘤/细胞杂交瘤技术 （系统：ECM2001）
在过去十年中，使用电融合技术进行杂交瘤的产生及抗体大大增加。电融合的过程可以通过显微镜进行观察，与PEG相比需要的细胞数量较少。使用电融合用于这种用途还有无毒性及高效性的优点。
Panova等人（1995）通过把人类B细胞与Heteromyeloma、Spam-8细胞进行电融合增强了人类杂交瘤的生成。Kreutz等人（1998）引入了一种使用电融合及FACS分选的新方法产生细胞杂交瘤。Cao等人（1995）建立了另一种快速非选择性方法通过电融合产生人类细胞杂交瘤。数据明确支持电融合用于这种重要目的的有效性。对于这些用途可以使用多种细胞融合附件及微型载玻片。
植物原生质的融合 （系统：ECM2001）
电融合可被用于融合植物原生质以产生杂交体及创造具有所需特性的作物。Hofmann-Tsay等人（1994）试验了可以的融合促进物质，发现一些多聚物可以便利融合过程而不影响细胞新生。Chen等人（1995）将原生质从2种种属的Porphyria进行融合，成功率高达85%。这些鼓舞人心的数据提示电融合与传统的PEG融合方法相比，可以改善融合效率以及可重复性。对于这些用途可以使用多种细胞融合附件及微型载玻片。
体内基因导入（IVGD） （系统：ECM830）
在体内基因转移的非病毒技术中，直接将质粒DNA注射进入肌肉内是简单、廉价及**的。Aihara及Miyazaki（1998）**次指出通过在肌肉内将DNA注射与电穿孔相结合，可以将表达增强100倍。
Mir等人（1999）使用多种类型的电极将基因传递进入多种种属的骨骼肌（大鼠、小鼠、兔、猴）。他们的结果显示通过使用电穿孔以及DNA注射：（1）基因转移的效率大大增加了，只是表达增强2-4倍；（2）不同实验之间的差别缩小了，而这正是单独DNA注射的主要缺点；（3）表达持续时间很长（数月），这对于长期临床应用非常重要；（4）不同种属的不同的肌肉都有阳性的反应，说明广泛的可用性；（5）基因表达非常特异仅在局部，而周围组织则没有影响到。这种技术成功用于其他组织，例如肝、睾丸、以及皮肤。
*近Vicat等人（1999）通过体内电穿孔仪将基因传递如小鼠脑组织。与被称为有力的脑组织基因转移的非病毒载体的pCMV-luc与PolyEthylenlmine联合的方法相比，电穿孔的效率要高50倍。Nishi等人证明使用电穿孔可以获得有效的神经胶质瘤基因转移。Nishi还显示对实体瘤进行电基因**后肿瘤生长阻滞了50-90%。Dean等人将基因电导入完整的肠系膜动脉获得了成功。电穿孔已经被证实确实是进行体基因/**转移方面一项有前途的技术，有许多新奇的用途。BTX公司特制的2针阵列电极、Genetrodes、卡钳电极、Tweezertrodes提供将基因侵入性以及侵入性转移入组织的方法。
卵内基因转移（IOGD） （系统：ECM830）
Muramatsu等人（1997）比较了3种转染方法用于将外源基因转入早期鸡胚进行表达。他发现与脂质体转染及基因枪相比，电穿孔是*有效的方法。Takeuchi等人（1999）使用电穿孔技术将早期鸡胚转染了tbx5及tbx4基因，以确定肢芽的翅/腿标志。
对于这种用途已经开发出特用的电极。Genetrodes、L形状针电极，被用于测定鸡胚及靶向组织的特定区域。许多研究人员已经转染了眼、心或者肢体组织，方便了发育生物学方法的进一步研究。刚上市的足控开关具有遥控功能，是ECM830可以在不需要手操作的情况下进行激活，这对于卵内、体内以及体外胚胎用途非常重要。
体外胚胎基因转移（IVEGD） （系统：ECM830）
Tasaki等人（1999）讨论了使用电穿孔在体外小鼠胚胎方面的运用。小鼠胚胎有柱状的结构而且有比家禽更多胚胎培养基操作需求。有可能对胚胎进行电穿孔用于异位表达研究。在小鼠中后脑部的基因表达已经被观察。这个技术也用在交配后9.5天小鼠胚胎，以研究Hu基因在神经分化中的功能。BTX为这些目的提供一种全新的电极：Genepaddles。