多肽的溶解和保存

日期:2020-08-09 22:40
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摘要:

建议先用少量肽来试验*适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入溶液并将之稀释至*终浓度。即先溶解,后加入缓冲液。注意:总是将多肽加入到适当溶剂中搅拌,而不能采用其它方式。

     
  冻干多肽的溶解  
     
  多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。
虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除了*短的肽链外,该现象发生在几乎所有肽链,与极性无关。因此,溶解多肽的**个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水(如果条件允许则用无氧水)。
多肽溶液可能遇到**降解。为避免该现象的发生,多肽应溶解在无菌的蒸馏水中,或者用0.45或0.2µm孔径的滤膜过滤**。
包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化,因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。
若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热和多肽降解。
若多肽中包含多个碱性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;对于疏水性非常强的多肽,则使用50%乙酸。
若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙基**或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整。
异丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有机溶剂的量则必须很少,否则将严重影响滞留时间。
若多肽因为含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烃侧链而高度疏水,或为中性肽时,DMF或DMSO等膜变性剂的使用,有助于多肽的溶解。
a. 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。
b. 膜变性剂适于多肽分析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。
c. DMF是*佳变性剂(*高浓度可达30%),滴加至多肽溶解。
d.反相层析时,DMF将与洗脱液前峰一起流出,依进样量的多少,峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,多肽的量将降低。 
     
  冻干多肽的保存  
     
  所有标明“保持冻干”的产物,都必须保存在冰冻条件下,*好-20℃,若保存在-10℃以下,大多数肽可维持几年的活性。
当使用冰冻产品时,开盖之前,瓶或试管应在装有新鲜干燥剂的干燥箱内升至室温。对于保存于-20℃的产品,这个过程需要一小时或更长,随包装大小而异。否则,当瓶打开时,水气进入导致多肽凝缩而降低其稳定性。一旦打开,应迅速称量完毕,并立即密闭以免潮解,尤其亲水肽更应注意。 
     
  多肽溶液的保存  
     
  多肽溶液比干粉的稳定性差很多,为了得到*好结果,遵循下列原则:
反复冻融有损于肽的活性,所以建议分装成小包装保存。需要多少解冻多少,用后弃掉剩余物。
溶于pH5~7无菌的缓冲液中,贮存于-20℃。
包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此须保存在无氧化剂的环境中。
由于**能降解多肽,因此贮存前必须过滤**。

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